干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

作者：杨学智; 沈红; 李群; 代自超; 杨荣强; 黄国宾; 陈蕊; 王芳^*; 宋精玲^*; 华海蓉^*

来源：南方医科大学学报, 2022, 42(05): 658-664.

• 胶质瘤
• P2X4受体
• 肿瘤相关巨噬细胞
• 侵袭
• 迁移

目的 研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组），利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核，建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠，取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织，采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态，利用免疫荧光检测Iba-1、P2X4受体的表达情况；应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs，采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况；采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况；采用siRNA P2X4，下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达，RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达；利用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与对照组相比，荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P<0.0001），且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）；使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后，M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001）,M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001），但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著，同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA(P<0.01)及蛋白表达水平（P<0.01,P<0.05）降低，并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论 降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

• 单位
  昭通市第一人民医院; 昆明医科大学