大鼠尾椎与腰椎髓核组织及细胞的分离培养以及髓核表型的对比研究

作者：康新桂; 吴小涛; 王锋; 时睿; 蔡峰; 朱厚毅

来源：东南大学学报(医学版), 2016, 35(03): 293-301.

• 椎间盘
• 髓核
• 表型
• 尾椎
• 腰椎
• 大鼠

目的:对大鼠尾椎与腰椎髓核组织及细胞进行体外分离、培养与观察,并对髓核软骨样细胞表型进行对比研究。方法:分别取12周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠腰椎与尾椎椎间盘,用分析天平称取髓核组织的质量。组织贴壁法分离培养髓核细胞;倒置相差显微镜观察HE染色的髓核组织及不同代次细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测第2代尾椎与腰椎髓核细胞髓核表型的差异。结果:腰椎髓核组织总质量及单个节段的质量均显著低于尾椎(P<0.05)。成功分离培养腰椎与尾椎髓核细胞。腰椎原代髓核细胞贴壁时间及70%融合时间显著高于尾椎原代髓核细胞(P<0.05);第2代腰椎髓核细胞中脊索样细胞数量显著低于尾椎髓核细胞(P<0.05)。HE染色示尾椎髓核组织中脊索样细胞较多,细胞外基质丰富,髓核样软骨细胞数目较少。第2代腰椎与尾椎髓核细胞凋亡率差异无统计学意义。实时PCR示第2代尾椎髓核细胞与腰椎髓核细胞相比,前者显著下调低氧诱导因子(Hif)2α、aggrecan、Brachyury(T)、细胞角蛋白(Krt)8、Krt18及Krt19的表达(P<0.05),且Brachyury(T)、Krt8、Krt18及Krt19的下调量更明显;显著上调碳酸酐酶(Car)3、Car12的表达(P<0.05)。结论:与腰椎髓核组织相比,尾椎髓核组织中的脊索样细胞数目更多,细胞活性更佳,组织量大,易取材,更适合作为椎间盘退变研究的种子细胞。体外单层培养的腰椎与尾椎髓核细胞表型存在差异。

• 单位
  东南大学; 东南大学附属中大医院