雌激素处理的hBMSC对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

作者：张晓东; 孙石磊; 王冠; 李霄凌; 姚立杰; 徐浩; 张鹏; 沈雷

来源：中国应用生理学杂志, 2022, 38(04): 289-294.

• 雌激素
• 人骨髓间充质干细胞
• 细胞损伤
• 高糖条件
• 人脐静脉血管内皮细胞
• 细胞培养

目的:探讨雌激素处理人骨髓间充质干细胞(hBMSC)对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及机制。方法:采用30 mmol/L葡萄糖刺激hBMSC细胞建立高糖模型并分组：以无刺激者为高糖对照组(HG组)、以20μmol/L雌激素处理者为高糖雌激素组(HG+E2组)、以5μmo/L蛋白激酶B(PKB/Akt)抑制剂Triciribine预处理45 min后，再以20μmol/L雌激素处理者为高糖Akt抑制剂组(HG+E2+Triciribine组)和正常条件培养的hBMSC为正常对照组(NG组)。分别于处理12 h后，采用CCK8法检测各组hBMSC的细胞活力，硝酸还原酶法和ELISA法检测各组培养基上清中NO、VEGF和IL-8的含量(n=6),48 h后采用Western blot检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达水平(n=3)。此外，提取各组hBMSC的培养基上清作为条件培养基(CM)培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)并分组为：HG-CM组(HG组条件培养基处理)、HG+E2-CM组(HG+E2组条件培养液处理)、HG+E2+Triciribine-CM组(HG+E2+Triciribine组条件培养基处理)和HG-H组(高糖对照组，30 mmol/L葡萄糖终浓度处理),分别于12 h后，采用CCK8法检测各组HUVEC的细胞活力(n=6),24 h后采用流式细胞术检测各组HUVEC细胞的凋亡率(n=3);48 h后采用划痕实验观察各组HUVEC细胞的迁移率(n=3)。结果:与NG组相比，HG组中hBMSC细胞活力和细胞内eNOS蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),细胞培养液上清中NO、VEGF和IL-8含量减少(P<0.05);与HG组相比，HG+E2组中hBMSC的细胞活力和细胞中eNOS蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05),细胞培养基上清中NO、VEGF和IL-8含量增加(P<0.05),而当hBMSC细胞中Akt蛋白活性被抑制后，HG+E2+Triciribine组中上述结果指标呈反向变化(P<0.05)。此外，与HG-CM组相比，HG+E2-CM组中HUVECs的细胞活力和迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡比例降低(P<0.05),而与HG+E2-CM组相比，HG+E2+Triciribine-CM组中HUVECs的细胞活力和迁移能力降低(P<0.05),细胞凋亡比例增加(P<0.05)。结论:雌激素可能通过激活hBMSC细胞Akt/eNOS信号通路，促进NO、VEGF和IL-8的分泌，进而增加HUVECs的细胞活力和迁移能力，并抑制细胞凋亡的发生，对高糖诱导的HUVECs细胞损伤发挥保护作用。

• 单位
  解剖学教研室; 齐齐哈尔医学院; 基础医学院; 首都医科大学; 复旦大学