霍乱弧菌二核苷酸环化酶的可溶性原核表达及其表达产物的生物活性分析

作者：杨帆; 龙朝琳; 何小兵; 陈国华; 李维克; 贾怀杰; 房永祥; 娄忠子; 景志忠^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(12): 1533-1539.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0195

• 霍乱弧菌
• 二核苷酸环化酶
• 环二核苷酸
• 原核表达
• 纯化
• 活性分析

为获得具有生物活性的霍乱弧菌二核苷酸环化酶(Dnc V)蛋白与环二核苷酸c-di-GMP、c-di-AMP和3’3’-cGAMP,构建了DncV基因的原核表达载体p ET-28a-SUMO-DncV,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件实现了可溶性表达;利用镍柱亲和层析纯化表达的重组蛋白产物,随后切除SUMO标签蛋白,再用亲和层析进一步纯化,获得了纯度较高的重组Dnc V蛋白;将获得的重组Dnc V蛋白通过体外酶促反应分别合成了c-di-AMP、c-di-GMP和3’3’-c GAMP,且合成产物能够诱导细胞产生Ⅰ型IFNs。结果表明,重组蛋白Dnc V及其产物c-di-GMP、c-di-AMP和3’3’-cGAMP均具有生物活性,这为后续抗病毒、抗肿瘤药物以及免疫增强剂和佐剂的开发奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室