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摘要
目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库,以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA,逆转录合成双链cDNA,经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后,连接T7Select 10-3载体,体外包装扩增获得N315 T7噬菌体cDNA展示文库;通过双层平板实验鉴定所建原始文库及扩增文库的库容;PCR鉴定文库插入片段质量。结果原始文库重组克隆数为1.335×106pfu,扩增文库的噬菌体滴度为3.26×1010pfu/mL。随机PCR扩增显示文库阳性重组率为100%,插入片段在300~1 500 bp之间。结论 MRSA ...
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