Cyclin B1正、反义全长cDNA腺病毒载体的构建及对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

作者：李洁; 陈平; 胡火珍

来源：四川大学学报（医学版）, 2009, 40(05): 765-769.

• 细胞周期蛋白B1
• 重组腺病毒
• 基因治疗
• 肿瘤

目的利用pAd/CMV/V5-DEST腺病毒载体系统构建含有人细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)正、反义全长cDNA的重组腺病毒,并研究其对人宫颈癌细胞株HeLa增殖及凋亡的影响。方法通过RT-PCR获取Cyclin B1全长cDNA,分别以正、反方向插入pENTR11,与pAd/CMV/V5-DEST进行同源重组后获得正确的重组腺病毒质粒,经293A细胞包装扩增获得重组病毒颗粒。重组腺病毒体外感染HeLa细胞,通过细胞计数和流式细胞术观测其对细胞增殖及凋亡的影响。结果Cyclin B1基因成功克隆到载体上,并经293A细胞包装出病毒颗粒。此重组腺病毒感染HeLa细胞后,反义Cyclin B1能明显抑制细胞的生长并且促进细胞凋亡。结论成功构建了携带人Cyclin B1正、反义全长cDNA的重组腺病毒载体,此载体可在HeLa细胞中发挥生物学作用。

• 单位
  生命科学学院; 四川大学华西医院; 生物资源与生态环境教育部重点实验室; 四川大学; 生物治疗国家重点实验室