梅毒螺旋体特异性抗原Tp0453及其截短蛋白的克隆、表达及活性检测

作者：郑和平; 覃晓琳; 黄进梅; 薛耀华; 白顺; 吕萍; 杨斌

来源：皮肤性病诊疗学杂志, 2014, 21(04): 283-286.

• 梅毒螺旋体
• 外膜蛋白
• Tp0453
• Western blot

目的:克隆和鉴定梅毒螺旋体(Tp)特异性抗原Tp0453及其截短蛋白(Tp0453-s),并用梅毒患者血清检测抗原反应性。方法:PCR扩增Tp0453和Tp0453-s基因,分别构建重组表达质粒pGEX-6P1-Tp0453和pET-28a(+)-Tp0453-s,经测序鉴定正确后转染E.coli BL21(DE3),对表达产物进行SDSPAGE电泳和Western blot鉴定。用不同分期梅毒患者血清作为一抗,Western blot检测抗原反应性。结果:经鉴定,2个原核表达质粒均构建成功,SDS-PAGE电泳和Western blot结果显示2个蛋白大小与预期一致。Western blot检测显示2个蛋白均与梅毒患者血清特异性结合,而与非梅毒患者血清无交叉反应。结论:成功克隆、表达并纯化了Tp0453和Tp0453-s蛋白,2个蛋白均有良好的抗原反应性。