卡氏棘阿米巴肌动蛋白1的免疫学特性和细胞黏附功能

作者：李晶; 杨舒越; 赵佳欣; 孔繁利^*; 郭思瑶; 冯宪敏^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(02): 308-314.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230206

• 卡氏棘阿米巴
• 滋养体
• 细胞黏附
• 免疫原性
• 免疫反应性

目的：探讨卡氏棘阿米巴(Ac)肌动蛋白1 (Actin 1)(Ac-Actin 1)的免疫学特性，初步阐明Ac-Actin 1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用。方法：以Ac滋养体cDNA为模板，构建原核表达载体pET 22b (+)-Ac-Actin 1，转化大肠埃希菌感受态细胞BL21 (DE3);1 mmol·L-1异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导表达重组Ac-Actin 1蛋白(rAc-Actin 1)，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对rAc-Actin 1进行可溶性分析，通过亲和层析方法纯化带有His标签的rAc-Actin 1。3只新西兰白兔随机分为对照组(1只)和实验组(2只)；实验组兔以rAc-Actin 1为免疫原皮下注射400μg，对照组兔注入等量生理盐水，制备抗rAc-Actin 1多克隆兔血清；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体效价并测定IgG亚型，Western blotting法检测抗rAc-Actin 1多克隆兔血清与rAc-Actin 1的免疫反应性，间接免疫荧光实验(IFA)检测Ac-Actin 1在Ac滋养体中的定位。以正常滋养体为对照，抗rAc-Actin 1多克隆兔血清阻断Ac滋养体后与Vero细胞共孵育，显微镜观察Ac-Actin 1对Vero细胞的黏附作用。结果：SDSPAGE和BCA蛋白浓度检测，获得高浓度rAc-Actin 1 (1.7 g·L-1)蛋白。ELISA法检测，制备的兔抗rAc-Actin1特异性多克隆抗体效价为1∶6 400, IgG1和IgG2a浓度分别为116.76 g·L-1和1 136.15 mg·L-1。Western blotting法检测，兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体可与rAc-Actin 1发生特异性结合，具有良好的免疫反应性。IFA检测，rAc-Actin 1主要定位于Ac滋养体的细胞膜上。显微镜观察，与对照组比较，随着抗体与虫体孵育时间的延长，实验组Ac滋养体对Vero细胞的黏附率明显降低(P<0.01)，抗rAc-Actin 1特异性多克隆抗体可有效阻断Ac滋养体与Vero细胞的黏附。结论：rAc-Actin 1具有良好的免疫原性和免疫反应性，参与Ac虫体与宿主细胞的黏附作用。

• 单位
  基础医学院; 北华大学; 吉林医药学院