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摘要
目的研究大气细颗粒物(PM2.5)对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及姜黄素的保护作用。方法采集广州市区大气PM2.5并染毒的EA.hy926细胞,分为空白组、模型A组(PM2.5,20μg·m L-1)、模型B组(PM2.5,200μg·m L-1)、模型C组(PM2.5,400μg·m L-1)。模型制备后测得PM2.5剂量200μg·m L-1可显著影响EA.hy926细胞存活率、凋亡及炎症和氧化应激指标,为此药物干预中,PM2.5剂量均选为200μg·m L-1。以下实验分为空白组、模型组(200μg·m L-1PM2.5)、低中高3个剂量实验组(PM2.5+低剂量姜黄素组、PM2.5+中剂量姜黄素组、PM2.5+高剂量姜黄素组),分别以5,10,20μmol·L-1姜黄素预处理细胞1 h后,加200μg·m L-1的PM2.5染毒24h;对照组,以10μmol·L-1的Anthrapyrazolone(SP600125)预处理细胞30 min后,加200μg·m L-1的PM2.5染毒24 h。用噻唑蓝(MTT)比色法测细胞存活率,以流式细胞术测细胞凋亡;用蛋白免疫印迹法检测p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白表达,用酶联免疫吸附测定白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果与空白组的各项指标比较,模型B、C组均有明显改变,说明造模成功。与模型组的(83.27±1.41)%比较,中、高2个剂量实验组及对照组EA.hy926细胞存活率分别为(88.37±1.46)%,(91.49±1.34)%,(88.35±1.06)%显著增加(P<0.05);与模型组的p-JNK蛋白表达(0.82±0.03)%比较,中、高2个剂量实验组及对照组的p-JNK蛋白表达分别为(0.41±0.03)%,(0.39±0.04)%,(0.10±0.01)%明显下调(P<0.05);与模型组的Bax/Bcl-2蛋白比率4.29比较,中、高2个剂量实验组及对照组的分别为1.44,1.10,1.95;与模型组的凋亡率(22.35±1.21)%比较,中、高2个剂量实验组及对照组的凋亡率分别为(16.34±1.29)%,(9.44±0.98)%,(14.45±1.12)%显著降低(P<0.05);与模型组的IL-6为(523.67±14.36)ng·L-1比较,中、高2个剂量实验组及对照组的IL-6分别为(465.31±14.29),(375.52±14.55),(480.44±16.12)ng·L-1显著降低(P<0.05);与模型组的TNF-α含量为(387.34±8.42)ng·L-1比较,中、高2个剂量实验组及对照组的TNF-α含量分别为(329.45±7.57),(240.46±7.34),(352.53±8.25)ng·L-1显著降低(P<0.05);与模型组的SOD活性为(11.46±0.35)μmol·L-1比较,中、高2个剂量实验组及对照组的SOD活性分别为(13.87±0.31),(16.43±0.32),(14.45±0.36)μmol·L-1显著增加;与模型组的MDA含量为(4.15±0.12)μmol·L-1比较,中、高2个剂量实验组及对照组的MDA含量分别为(3.21±0.22),(2.38±0.23),(3.49±0.26)μmol·L-1明显降低(P<0.05);与模型组的LDH活性为(1.14±0.06)k U·L-1比较,中、高2个剂量实验组及对照组的MDA含量分别为LDH活性分别为(0.94±0.05),(0.73±0.05),(0.84±0.06)k U·L-1明显降低(P<0.05)。结论姜黄素可通过抑制JNK通路,减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤。
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