摘要
目的:探讨维生素C(VC)对树突状细胞(DC)的影响,并检测DC细胞成熟情况,为快速制备DC疫苗提供一种可行方法及思路。方法:采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血PBMC,贴壁后获得单核细胞。用不同浓度VC对DC进行孵育(24 h),后经PBS洗涤,并设立空白对照组(V0)。流式细胞仪检测DC表面共刺激分子CD80/86及HLA-DR,CD40表达情况。通过设置VC浓度梯度及时间梯度,考察VC对DC刺激的最佳浓度及最佳成熟时间,同时分析VC促进DC成熟的原因。结果:VC可显著刺激DC细胞成熟,其CD80/86表达较未添加VC组有明显提升。且本研究显示VC刺激DC的最佳浓度为1 mmol/L,当DC培养至第三天时,VC组CD80/86表达率为(78.6±4.6)%,而空白对照组V0仅为(34.1±5.7)%;DC表面HLA-DR表达:VC(56.8±4.4)%,空白对照组V0为(25.4±4.7)%,两组差异有统计学意义,P<0.05;进而我们考察了VC对DC细胞CD40、CD40L表达情况,结果显示,VC 2.5 mmol/L组CD40表达率最高可达(59.3±3.7)%,V0组仅为(11.1±2.4)%,说明VC可显著调节DC表面CD40的表达。而CD40L表达调节并未体现。荧光显微镜结果显示VC-DC抗原捕获能力显著提升。结论:VC可显著调控DC成熟,并可能通过上调CD40进而促进CD80/86及HLA-DR的表达,当VC浓度为1 mmol/L时,对DC调控作用最强。
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单位山西医学科学院山西大医院