微量样本中N-糖组分析技术的发展与应用

作者：孟波; 李晓宇; 崔新玲; 应万涛^*; 钱小红^*

来源：分析测试学报, 2019, 38(12): 1416-1422.

• N-糖链
• 糖组学
• 尿蛋白
• 基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪

针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C18和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制备(FASP)技术的N-糖组分析策略相比,使用GPAT技术可以实现微量免疫球蛋白G(IgG)和人肝癌HepG2细胞提取蛋白的原位N-糖链的释放和富集,样本起始量减少90%,可以从10μg IgG和10μg的HepG2细胞蛋白中分别检测到20条和39条N-糖链。从6例健康人(3例男性,3例女性)尿液中提取的10μg尿蛋白中检测到49条N-糖链。该方法实现了微量复杂蛋白样本N-糖链简便、快速的定量分析策略,为进一步的糖组学方法推广应用奠定了基础。

• 单位
  广东药科大学; 生物工程学院; 北京工业大学; 北京蛋白质组研究中心; 蛋白质组学国家重点实验室