肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究

作者：郑惠文; 杨智尧; 杨泽宁; 宋杰; 黄星; 李楠; 丁丽莎; 李恒; 李洪哲; 郭磊; 储曼曼; 施海晶; 刘龙丁^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2019, 39(06).

• EV-D68病毒感染
• 2A蛋白
• 抗病毒IFN-Ⅰ通路

目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence, IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect, CPE), 计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose, CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR, RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒, 在转染后的24 h, 重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明, 2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明, EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明, EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调, 但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明, 各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论 EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答, 病毒感染后期, 2A可以促进病毒较快增殖。

• 单位
  中国医学科学院; 北京协和医学院