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摘要
目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,通过体外实验探讨CRYAB基因沉默对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和迁移能力的影响。方法构建靶向CRYAB基因特异性sh RNA慢病毒载体并转染人骨肉瘤细胞MG-63细胞株,利用Real-time PCR和Western Blotting技术分别从m RNA和蛋白质水平检测其表达的变化。CCK-8法和细胞克隆实验检测沉默CRYAB基因后细胞的增殖能力,Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。结果 Real-time PCR和Western Blotting结果均表明,成功建立稳定转染sh RNA-CRYAB骨肉瘤细胞MG-63细胞株。CCK8实验结果显示sh RNA-CRYAB病毒转染组与阴性对照组相比细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),尤其在第四、五、六和第七天表现更明显;细胞克隆实验结果显示,sh RNA-CRYAB病毒转染组和阴性对照组的克隆形成率分别为5.2%和26.0%,具有显著性差异(P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示,sh RNA-CRYAB病毒转染组的细胞迁移率明显低于阴性对照组(P<0.01)。结论 sh RNA-CRYAB慢病毒干扰载体能有效抑制CRYAB基因在人骨肉瘤细胞MG-63中表达,进而抑制细胞增殖和迁移。
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