单细胞显微注射技术在原生动物草履虫研究中的应用

作者：史磊; 申香玉; 申远^*

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2020, 36(12): 1508-1513.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2020.10.1324

• 显微注射技术
• 草履虫
• 单细胞模型
• 外源基因表达

对大多数单细胞原生动物的分子遗传学研究,目前还缺乏行之有效的转基因手段。针对这种情况,本研究以第四双小核草履虫为对象,将包含自身调控序列的草履虫纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport,IFT)基因IFT43或IFT46插入表达载体Pzz02-GFP中,用单细胞显微注射术将重组质粒注入到第四双小核草履虫营养大核内。蛋白质免疫印记结果显示,与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标签偶联的IFT43或IFT46在草履虫细胞中表达,利用荧光显微镜或激光共聚焦成像系统观察,IFT43-GFP与IFT46-GFP融合蛋白显示出相似的纤毛定位,同时它们在草履虫多纤毛内的运输过程被动态记录。本研究表明,显微注射方法能够在草履虫细胞中实现外源基因转入和表达,在对单细胞模式生物的研究中具有广泛的应用前景。

• 单位
  新乡医学院; 基础医学院