羰基还原酶工程菌构建及其应用于还原制备S-CHBE

作者：张志斌; 吴小芳; 杨慧林; 颜日明; 曾庆桂; 汪涯; 朱笃

来源：食品与发酵工业, 2013, 39(12): 24-29.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2013.12.002

• 生物催化
• 羰基还原酶
• 密码子优化
• 诱导表达
• S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯(S-CHBE)是多种药物的手性中间体,可由4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)不对称还原合成。该研究对来自Candida magnoliae AKU4643的S1羰基还原酶基因进行E.coli密码子优化,获得的S1’基因序列并进行人工合成,利用该序列构建了基因工程菌BL21(DE3)/pET28a-S1’,提高了羰基还原酶表达效率,经诱导条件优化后羰基还原酶活力达11.49 U/mg蛋白;将BL21(DE3)/pET28a-S1’与E.coli BL21(DE3)/pET28a-gdh进行偶联,在单一水相中未添加辅酶条件下转化10 h,产物的摩尔转化率和对映体过量值(e.e.)分别达92.1%和100%。

• 单位
  江西科技师范大学; 生命科学学院; 国家单糖化学合成工程技术研究中心; 江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室; 江西省生物加工过程重点实验室; 江西师范大学