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摘要
目的构建含OVA-Fc融合基因的真核表达质粒,证明其能在真核细胞CHO细胞表达。方法通过PCR从OVA-pcDNA3.1质粒中扩增出全长的小鼠OVAcDNA,酶切后克隆到含有小鼠IgG2aFccDNA的真核载体pMIgV,然后将OVA-Fc酶切后亚克隆入pcDNA3.1,构建真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1;脂质体转染法将其导入CHO细胞,流式细胞仪、Westernblot、ELISA法检测融合蛋白OVA-Fc的表达。结果酶切鉴定和序列测定证明真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1构建正确;流式细胞术、Westernblot、ELISA法均检测到转染的CHO细胞能表达OVA-Fc融合蛋白。结论OVA-Fc-pcDNA3.1真核表达质粒构建正确并能在真核细胞中表达,该质粒的成功构建与表达为进一步将其作为DNA疫苗治疗肿瘤、哮喘等疾病奠定了基础。
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单位中国人民解放军陆军军医大学; 新桥医院
