高迁移率族蛋白B1真核表达载体的构建及其对肿瘤坏死因子-α报告基因活性的影响

作者：杨丽萍; 姚咏明; 李杰萍; 叶棋浓; 盛志勇

来源：中国中西医结合急救杂志, 2008, (03): 171-174.

• 高迁移率族蛋白B1
• 表达
• 报告基因活性
• 肿瘤坏死因子-α

目的克隆人的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因,插入pc-DNA3载体中并检测其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)报告基因活性的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出HMGB1基因,插入载体pc-DNA3中,确定所扩增的DNA序列;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)在293T细胞中检测其表达;应用报告基因方法检测其对TNF-α报告基因表达的影响。结果酶切和测序结果表明扩增的HMGB1序列正确,大小为648bp。在293T细胞中正确表达相对分子质量约24000的HMGB1蛋白。下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,构建的真核表达载体在内毒素刺激后以先增加后降低的方式影响TNF-α的活性,且对从95-120长度的TNF-α报告基因活性影响最明显。结论HMGB1以先增加后降低的方式影响TNF-α基因的表达,且主要通过26个碱基大小的片段发挥作用。

• 单位
  军事医学科学院; 解放军总医院