虾肝肠胞虫水通道蛋白基因EHP00＿492的克隆与表达特征分析

作者：李晨曦; 吴慧欣; 吴玉娇; 陈洁; 孟宪志; 潘国庆; 龙梦娴^*

来源：广东农业科学, 2023, 50(08): 154-162.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2023.08.016

• 虾肝肠胞虫
• 水通道蛋白
• 基因克隆
• 序列特征
• 表达
• 亚细胞定位

【目的】克隆虾肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei,EHP）水通道蛋白编码基因EHP00＿492，分析其在EHP成熟孢子中的表达特征，为研究EHP水通道蛋白的功能提供理论基础。【方法】以虾肝肠胞虫为材料，克隆获得完整的EHP00＿492基因，对其进行序列特征分析，构建pCold-TF-EHP00＿492重组表达载体，转化至大肠杆菌中异源表达重组蛋白，制备兔多克隆抗体。利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光实验分析EHP00＿492在EHP成熟孢子中的表达定位特征。【结果】EHP00＿492的编码基因全长729 bp，由242个氨基酸组成，富含亮氨酸，预测分子量为25 kD，无信号肽，含有6个跨膜结构域，具有MIP蛋白家族结构域和2个水通道蛋白保守的NPA/G基序。此外，EHP00＿492与其他微孢子虫水通道蛋白序列同源性较高，系统进化树分析结果显示，EHP00＿492与毕氏肠胞虫EBI＿27080蛋白亲缘关系最近。AlphaFold分析发现，EHP00＿492与已鉴定的家蚕微孢子虫水通道蛋白NbAQP和兔脑炎微孢子虫水通道蛋白EcAQP的蛋白质三维结构高度相似，推测EHP00＿492是一个潜在的水通道蛋白。蛋白免疫印迹结果显示，EHP00＿492蛋白在EHP成熟孢子中有表达，分子量为21 kD。亚细胞定位分析结果显示，EHP00＿492蛋白定位于EHP成熟孢子的孢壁上。【结论】初步明确了EHP00＿492蛋白的序列特征、结构特征及其与其他微孢子虫水通道蛋白的亲缘关系，以及其在EHP成熟孢子中的表达定位特征，可为进一步研究EHP水通道蛋白的功能提供基础。

• 单位
  西南大学