miR-488-3p靶向调控RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬的作用研究

作者：高源; 揭育祯; 马天龙; 汪乐新; 杨慧霞; 周瑜瑾; 焦运; 卢冠军; 马胜超^*

来源：中国比较医学杂志, 2022, 32(09): 1-9.

• 同型半胱氨酸
• miR-488-3p
• 肝细胞
• RAP1A
• 自噬

目的 探讨微小RNA(miR-488-3p)通过靶向调控RAS癌基因家族成员RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬中的作用。方法 体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予100μmol/L Hcy干预24 h,采用Western blot检测肝细胞自噬相关蛋白LC3、p62和RAP1A的表达水平，qRT-PCR检测肝细胞中miR-488-3p和RAP1A的表达；转染miR-488-3p inhibitor和mimics后，qRT-PCR和Western blot分别检测miR-488-3p的转染效率及其对LC3和p62蛋白表达的影响；TargetScan预测miR-488-3p与RAP1A基因相关性，Western blot检测miR-488-3p下游潜在靶蛋白(RAP1A)的表达改变；Pearson相关系数对肝细胞中miR-488-3p表达水平与自噬相关蛋白水平进行相关性分析。结果 与Control组相比，Hcy组肝细胞自噬相关蛋白LC3、RAP1A和miR-488-3p的表达水平升高(P<0.01),而p62表达明显降低(P<0.01);同时，转染miR-488-3p inhibitor和mimics后，与NC-inhibitor组比较，miR-488-3p inhibitor组中LC3和RAP1A蛋白的表达水平显著降低(P<0.01),p62表达明显升高(P<0.01);而与NC-mimics组相比，miR-488-3p mimics组中LC3和RAP1A蛋白表达水平明显增加(P<0.01),p62表达降低(P<0.01);进一步机制研究表明RAP1A是miR-488-3p的下游靶基因并受其正向调控。Pearson相关性分析发现，miR-488-3p的表达水平与LC3(r=0.9329,P=0.0002)蛋白表达呈正相关，而与p62(r=-0.8086,P=0.0083)表达则呈负相关。结论 miR-488-3p在Hcy介导的肝细胞中高表达，可通过靶向调控RAP1A的表达促进肝细胞自噬。

• 单位
  基础医学院; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院