摘要
目的探讨缺氧环境下诱导成骨细胞自噬对其增殖的影响。方法应用CoCl2制备细胞缺氧模型,蛋白质免疫印迹(Western blot)和细胞免疫荧光法分别检测h FOB1.19成骨细胞自噬标记蛋白微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的表达,透射电镜(transmission electron microscope,TEM)检测自噬小体;MTT法和流式细胞术检测自噬诱导对细胞增殖的影响。结果 CoCl2处理3h后LC3-Ⅱ表达开始升高,在6 h达到最高值,随后表达水平下降。免疫荧光结果显示,实验组LC3蛋白在细胞质中表达,强度高于对照组。TEM结果显示,在实验组中有自噬小体形成。与对照组相比,CoCl2作用后细胞生长受抑制,12h达到峰值,随后抑制能力减弱(P<0.05);流式细胞术检测显示G1期细胞增多,同时S期及G2期细胞减少。结论缺氧环境可激活成骨细胞自噬活性从而抑制细胞增殖。
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单位中南大学湘雅医学院