BMSCs分泌的miR-125b通过外泌体途径对体外成骨分化的影响

作者：陈超; 李昊天; 王槐骏; 杨城; 李玮民; 王春庆^*

来源：中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志, 2023, 16(04): 345-353.

• 骨髓间充质干细胞
• 外泌体
• miR-125b
• 成骨分化

目的 研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法 提取BMSCs原代，通过流式细胞仪进行其表面抗原(CD45、CD90)的鉴定来确定纯度，分别进行成骨诱导，茜素红染色检测成骨效果；成脂诱导，油红染色检测成脂效果。检测P3代上清液外泌体标志性蛋白CD9、CD63的表达量，电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、21天进行qRT-PCR测定外泌体内miR-125b及细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、Runx2的mRNA的表达量。BMSCs侵染miR-125b模拟物及模拟物阴性对照剂，miR-125b抑制剂及其抑制物阴性对照剂，转染后验证转染效率。转染后五组(前四组+生理盐水空白对照组)细胞上清液外泌体提取，提取后与BMSCs共培养，继续成骨诱导48 h, qPCR及蛋白质免疫印迹(Western Blot)分别测定BMSCs细胞ALP、Runx2、miR-125b的表达量。结果 (1)成功分离的BMSCs向成脂、成骨分化。(2)成骨诱导分化期间，P3代BMSCs的成骨标志基因ALP mRNA表达量明显增加，Runx2基因的表达趋势与其相同，而在上清液所提取的外泌体中，miR-125b趋势相反，差异有统计学意义(P<0.05)。(3)转染后共培养组中模拟物组较模拟物阴性对照组其成骨标志基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著下降，而抑制组较抑制剂阴性对照组其成骨基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著上升，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs来源miR-125b能通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。

• 单位
  贵州医科大学