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摘要
目的研究结核分枝杆菌Rv0446c的抗原表位及其免疫原性, 为结核病的免疫诊断技术及疫苗研发提供候选抗原及表位。方法利用生物信息学软件TE-predict和IEDB的T细胞表位预测软件对结核分枝杆菌抗原Rv0446c进行T细胞表位预测, 用ELISPOT实验检测表位在2019年1月到2020年12月期间来自佛山市第四人民医院和福州肺科医院的结核病患者(50例)、肺部疾病患者(39例)及健康志愿者(55例)中的免疫反应性。将60只6周龄BALB/c小鼠随机分成10组, 每组6只, 分别采用PBS、血蓝蛋白(KLH)、高剂量结核分枝杆菌抗原Ag85B(50 μg/只)、低剂量Ag85B(20 μg/只)、高计量P120、低剂量P120、高计量P121、低剂量P121、高剂量P123、低剂量P123(P120、P121、P123高剂量为100 μg/只、低剂量为50 μg/只)多肽对其皮下免疫, 每只小鼠免疫3次, 每次间隔2周, 末次免疫后4周, 应用ELISA方法检测各组小鼠脾细胞产生的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果预测的7条表位多肽中, ELISPOT试验筛选出4条阳性T细胞表位多肽P120、P121、P122、P123, 在结核病患者中检测灵敏度和特异度分别为30.0%、18.0%、6.0%、22.0%和96.8%、98.9%、100%、96.8%。与对照PBS组和KLH组比较, P120多肽能刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4、IL-10, P121多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ和IL-4(均P<0.05), P123多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ(均P<0.05)。P120、P121、P123多肽刺激小鼠产生的IL-2的水平高于PBS组低于Ag85B-L组和Ag85B-H组(均P<0.05), 但与KLH组差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 Rv0446c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性, 能刺激机体产生强烈的细胞免疫应答, 可用于结核病的临床诊断技术研究和新型结核亚单位疫苗的构建。
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