携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测

作者：张惊宇; 杨安萍; 李金星; 刘路然; 赵虹; 杨子超

来源：中风与神经疾病杂志, 2009, 26(03): 287-290.

DOI：10.19845/j.cnki.zfysjjbzz.2009.03.008

• BDNF
• 慢病毒载体
• 基因治疗

目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFUW中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率>90%,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功构建了携带BDNF基因慢重组病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病的治疗研究奠定了方法学基础。

• 单位
  神经内科; 哈尔滨医科大学附属第二医院; 哈尔滨医科大学附属第四医院