hTERT激活人骨髓间充质干细胞端粒酶活性

作者：滕勇; 胡蕴玉; 王捍国; 宿学家; 王臻; 关玉成; 高杰

来源：中国矫形外科杂志, 2007, (16): 1253-1256.

• 人端粒酶逆转录酶
• 端粒酶
• 人骨髓间充质干细胞
• 基因

[目的]明确外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)能否激活人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchyme stem cell,hBMSC)的端粒酶活性。[方法]培养人骨髓间充质干细胞,采用脂质体转染法,将编码hTERT基因的真核表达质粒pCIneo-hTERT导入单克隆培养的人骨髓间充质干细胞。利用G418加压筛选,稳定后,用RT-PCR检测hTERT mRNA的表达,Western Blot检测其蛋白质表达,专用检测盒RT-PCR法检测端粒酶的活性。[结果]骨髓间充质干细胞转染质粒pCIneo-hTERT后,生长状态良好。加G418后第2d,细胞开始悬浮,逐渐死亡。第10d,未转染组细胞在G418作用下全部死亡,转染组细胞开始克隆增殖。G418浓度降至100μg/ml维持筛选,20d左右开始出现明显抗G418细胞克隆。转染后细胞,表达hTERT的 mRNA及其蛋白,同时端粒酶活性显著增高。[结论]将外源性hTERT导入人骨髓间充质干细胞可以激活细胞的端粒酶活性,为建立永生化细胞系奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院; 中国人民解放军第八十八医院