RNA干扰SW480细胞HIF-1α双向凝胶电泳中横向拖尾的消除及条件的优化

作者：吴星烨; 傅仲学; 李明洋; 王学虎

来源：中国生物制品学杂志, 2009, 22(08): 748-752.

DOI：10.13200/j.cjb.2009.08.18.wuxy.028

• RNA干扰
• 结肠癌
• 蛋白质组学
• 双向凝胶电泳
• 横向拖尾

目的建立RNA干扰结肠癌SW480细胞系,并对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)双向凝胶电泳中的多个关键步骤进行优化,以消除横向拖尾。方法以携带针对HIF-1α两条干扰片段的pGenesil-11质粒转染SW480细胞,沉默HIF-1α。对双向凝胶电泳中样品裂解液、样品的处理方式、上样量及电泳条件等进行优化。结果转染第7天RNA干扰效果最好。RNA干扰后,SW480细胞蛋白用含有硫脲的裂解液B进行提取,以样品制备方法A进行处理后,上样200μg蛋白,延长除盐时间,聚焦50000伏小时,得到的双向凝胶电泳图基本没有横向拖尾,分离蛋白点1288±15。结论已成功建立了RNA干扰结肠癌SW480细胞系;优化的双向凝胶电泳可有效消除横向拖尾,为进一步分析、鉴定和寻找与疾病相关的蛋白质奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院