IDH1单克隆抗体的制备及表位鉴定和双抗体夹心ELISA的建立

作者：杜晓娟; 孟麟; 孙天一; 寿成超^*

来源：中国免疫学杂志, 2019, 35(12): 1482-1486.

DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2019.12.015

• IDH1
• 单克隆抗体
• 抗原表位
• 双抗体夹心ELISA

目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH1的单抗克隆。构建并表达IDH1的不同截短体融合蛋白,用Western blot和ELISA检测不同单抗与不同截短体蛋白的反应。通过双抗体夹心ELISA进行两两配对,获得有较好检测效果的配对抗体。结果:通过GSTIDH1和GST蛋白的ELISA双筛和Western blot的进一步鉴定,获得了8株抗IDH1的单克隆抗体,分别命名为1H8、4H7、5C8、7C3、7E12、13F6、16B11和16H7; 5C8和7C3抗体识别的抗原表位位于IDH1 119～197位氨基酸; 4H7的识别表位位于197～211位氨基酸,7E12和16B11的识别表位位于211～314位氨基酸,1H8和16H7的识别表位位于314～329位氨基酸,13F6的识别表位位于314～415位氨基酸。在双抗体夹心配对实验中,1H8包被抗体,4H7作为检测抗体,可获得相对较高的检测敏感性。结论:制备获得了8株抗IDH1特异性单克隆并鉴定了各自的抗原表位识别区域,初步建立了ELISA双抗体夹心检测法,为后续外周血中IDH1的检测奠定了基础。

• 单位
  北京市肿瘤防治研究所; 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室