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摘要
目的 建立小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages,BMDM）培养模型，并对BMDM进行细胞表面标志物及吞噬能力鉴定。方法 采用32℃培养10 d和37℃培养3 d的方式培养L929细胞，检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）的浓度。获取小鼠骨髓细胞后，分别以M-CSF和两种条件培养的L929细胞上清进行诱导分化，通过光学显微镜对诱导分化后的BMDM进行形态学观察；流式细胞术检测CD11b阳性细胞株所占百分比，免疫荧光法观察诱导后巨噬细胞表面标志抗原CD11b和CD16的表达；对表达绿色荧光蛋白的大肠埃希菌进行吞噬试验鉴定BMDM的吞噬功能。结果 32℃培养10 d的L929细胞上清中M-CSF的浓度显著高于37℃培养3 d(P <0.05)。3种诱导方式均可使小鼠骨髓源细胞分化成熟，经32℃培养10 d的L929细胞上清诱导分化后的BMDM生长状态最佳。流式细胞术检测显示巨噬细胞表面标志抗原CD11b阳性率为80.62%，免疫荧光检测显示诱导分化后的BMDM细胞表面有巨噬细胞标志性抗原CD11b和CD16的表达，且具有对表达绿色荧光蛋白的大肠埃希菌良好的吞噬能力。结论 成功制备了小鼠BMDM，并优化了制备和鉴定的条件，为研究免疫细胞功能、病原微生物与巨噬细胞相互作用提供了理想的细胞模型制备方法。
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单位宁夏大学; 生命科学学院
