摘要

目的 HP联合MNNG处理人食管上皮(HEEC)细胞,观察其对细胞增殖及周期的影响。方法 CCK8法测定MNNG的IC50值,确定染毒浓度;HP以感染复数(MOI)=100∶1(细菌∶细胞=100∶1)为实验浓度;分为对照组、HP处理组、MNNG处理组、HP+MNNG联合处理组(联合组),并分别在处理后1、6、12 h测定细胞增殖能力、细胞周期及相关周期蛋白表达的变化。结果 MNNG IC50值为40.90μmoL/L,本研究以1/2 IC50值为实验浓度。对照组和MNNG组细胞形态无明显变化,在6 h和12 h后HP处理组和联合组细胞形态有较大改变,主要表现为细胞质紊乱不均匀,出现空泡样变化等。在经过1、6、12 h处理后,各组增殖速度为联合组<HP处理组<MNNG处理组<对照组(F1 h趋势=1 089.3,P<0.001;F6 h趋势=322.78,P<0.001;F12 h趋势=50.01,P<0.001)。各处理组随着时间的延长,细胞增殖速度变缓(FHP=370.44,P<0.001;FMNNG=65.01,P<0.001;F联合=98.46,P<0.001)。各组细胞在不同时间处理后G0/G1、S、G2/M细胞周期差异均有统计学意义(P<0.05)。随着染毒时间的延长,HP组、MNNG组和联合组均呈现G2/M期阻滞逐渐增大(FHP=238.76,P<0.001;FMNNG=182.47,P<0.001;F联合=58.43,P<0.001),且同一时间为联合组大于HP和MNNG单独处理组(F1 h=32.73,P<0.001;F6 h=70.37,P<0.001;F12 h=125.41,P<0.001)。染毒12 h后与对照组相比,其余3组细胞Cyclin B1蛋白表达量均显著升高,差异有统计学意义(P均<0.001),以联合组Cyclin B1表达最高,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论 HP及MNNG均能抑制HEEC细胞的增殖并改变其固有的细胞周期,联合作用表现更为明显,周期蛋白Cyclin B1表达升高,细胞周期G2/M期阻滞增大。