流产布鲁氏菌BCSP31基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达

作者：曹小安; 邱昌庆; 周继章; 蔺国珍

来源：吉林农业大学学报, 2007, (06): 683-686.

DOI：10.13327/j.jjlau.2007.06.025

• 流产布鲁氏菌
• BCSP31基因
• 克隆
• 可溶性表达 Brucella abortus
• BCSP31 gene
• clone
• soluble expression

设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经NotⅠ和EcoRⅠ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞。酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确。用IPTG诱导表达构建成功的阳性克隆,对产物进行SDS-PAGE和Western-blotting检测,发现表达产物出现预期分子量57 kD的融合蛋白,该蛋白能与牛流产布鲁氏菌阳性血清发生反应,进一步证明目的蛋白主要以可溶性形式存在,表达量约占总蛋白的40%,应用GST琼脂糖凝胶FF纯化可得到纯度较高的表达产物。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室