胎鼠皮肤无瘢痕愈合培养液优化及皮肤细胞增殖活跃区研究

作者：王海涛; 姜仁军; 李树伟^*

来源：中华皮肤科杂志, 2017, 50(02): 99-104.

• 伤口愈合
• 瘢痕
• 转录因子AP-1
• 无瘢痕愈合
• 胎鼠

目的优化昆明远交系(KM)胎鼠皮肤无瘢痕愈合模型的培养液, 定位并分析皮肤创伤愈合中细胞增殖活跃区。方法取60只胎龄15 d小鼠背部皮片180块, 用无菌微创器在皮片上统一造创, 随机等分到6组培养液中培养3 d, 包括高糖改良Eagle培养基(DMEM)组、DMEM+ 5%胎牛血清(FBS)组、DMEM+ 10% FBS组、低糖Eagle培养基(MEM)组、MEM+ 5% FBS组、MEM+ 10% FBS组。HE染色后观察各组皮肤创口愈合情况, 筛选最适培养条件。在最适培养条件下采用EdU细胞标记物定位皮肤创口愈合处细胞增殖活跃区, 并用免疫荧光检测其中AP-1蛋白表达。结果胎鼠微创皮片培养3 d后, DMEM组、DMEM+ 5% FBS组、DMEM+ 10% FBS组、MEM组、MEM+ 5% FBS组、MEM+ 10% FBS组皮片愈合率分别为0、3.33%、6.67%、3.33%、46.67%、26.67%, 6组皮片愈合率差异有统计学意义(χ2= 41.39, P < 0.05)。两两比较显示, MEM+ 5% FBS组皮片愈合率显著高于除MEM+ 10% FBS组外的其他4组(均P < 0.01)。logistic回归分析显示, MEM(OR= 11.717, 95%CI 3.274～41.934, P < 0.001)及FBS浓度(5% FBS:OR= 24.625, 95%CI 3.027～200.299, P= 0.003;10% FBS:OR= 13.449, 95%CI 1.618～111.813, P= 0.016)均是促进胎鼠微创皮片愈合的因素。在MEM+ 5% FBS培养条件下, 真皮和表皮愈合形态最好, 且创面处表皮无增厚现象。EdU细胞增殖标记分析显示, 胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是创面愈合过程中两个主要的细胞增殖活跃区, 同时AP-1蛋白在这两个细胞增殖活跃区也有大量表达。结论 MEM+ 5% FBS为体外培养胎鼠皮肤创伤愈合的最适培养液。胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是皮肤创伤愈合中两个主要的细胞增殖活跃区, 在创面愈合过程中起到重要作用。

• 单位
  塔里木大学; 生命科学学院