基于荧光检测的流感病毒神经氨酸酶中药抑制剂快速筛选方法的建立与应用

作者：谢俊杰; 谭鹏^*; 郑川; 张定堃; 尚强; 何淋泷; 郝露; 赵军宁

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(07): 185-192.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220758

• 流感病毒神经氨酸酶
• 荧光检测
• 中药
• 分子对接
• 质量一致性
• 板蓝根颗粒
• 抗病毒颗粒

目的：建立一种基于荧光检测的流感病毒神经氨酸酶(NA)中药抑制剂快速筛选方法。方法：方法的构建原理是供试品和一定数量的NA作用后，部分NA的活性会被供试品抑制，加入底物后仍具有活性的NA与荧光底物结合后在特定波长下可以产生荧光，根据测得的荧光强度计算供试品对NA的抑制率，从而评估供试品对NA的体外抑制活性。利用建立的方法对来源于12味中药的49个化学成分进行体外抗NA活性评价。利用NA蛋白受体与供试品对接后的结合能和抑制常数的理论计算值来证明实测结果的准确性。将建立的方法应用于检测不同批次板蓝根颗粒和抗病毒颗粒在体外抑制NA的活性，以评价不同批次样品间的质量一致性。结果：方法学考察结果表明该方法具有较好的准确性和重复性。49个成分的筛选结果显示，其中22个成分在体外对NA的抑制活性强于帕拉米韦[半抑制浓度(IC50)131.2μmol·L-1]，如夏佛塔苷、异荭草苷、诃子酸、胡薄荷酮、异夏佛塔苷等，其余27个成分在体外对NA的抑制活性弱于帕拉米韦。分子对接结果显示，大部分化合物的结合能和抑制常数理论计算结果和实测结果基本一致。12批板蓝根颗粒对NA的抑制活性检测结果显示，样品A1、A2、B2、C1、C2、E2和F2之间的质量一致性较好。同一厂家生产的9批抗病毒颗粒对NA的抑制活性检测结果显示，样品K1～K9在质量浓度为0.02 g·m L-1时对NA的抑制率分别为37.68%、36.18%、31.37%、33.98%、40.36%、33.76%、40.69%、41.08%、40.06%，平均值37.24%。结论：该研究成功建立了一种可用于快速评价中药(来源于中药的化学成分或中成药)是否具有体外抗NA活性的分析方法，可作为现有NA抑制剂筛选方法的有力补充。利用该方法从12味中药中筛选得到22个成分对NA具有较好的体外抑制活性，可为研发抗流感小分子药物提供候选化合物。

• 单位
  食品与生物工程学院; 成都大学; 国家中医药管理局; 四川光大制药有限公司; 四川省中医药科学院; 成都中医药大学