TRIP-1抗体的制作及应用

作者：张宏玲; 万骏; 董一辰; 曹威; 张新胜; 张锦勰; 黄来强

来源：生物技术通报, 2013, (03): 139-143.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.03.032

• 原核表达纯化
• TRIP-1蛋白
• 动物免疫
• 抗血清
• 抗体鉴定

旨在制作TGF-β二型受体结合蛋白TRIP-1的抗体,以便推进对该蛋白在TGF-β信号通路以及癌症发生发展中的功能研究。首先克隆出人的TRIP-1基因,构建其原核重组表达载体pET-His-TRIP-1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得TRIP-1蛋白,纯化后将其分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),免疫4次后取血清,并对抗血清进行效价和亲和力测定。通过Western blot和免疫荧光试验鉴定抗血清特异性。最后,利用proteinG初步纯化抗血清。结果表明,通过重组表达获得抗原蛋白,纯化后免疫新西兰大耳兔和昆明鼠可得到效价较高的抗TRIP-1的多克隆抗体,在稀释倍数较高的情况下仍可以用于Westernblot和免疫荧光试验,且有非常好的特异性。

• 单位
  清华大学深圳研究生院; 清华大学; 生命科学学院