山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立

作者：张元锌; 王闫宇; 云艳虹; 陈俊朴; 石惠宇^*; 王学梅

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(05): 1917-1925.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.05.032

• 过氧化氢
• 山羊乳腺上皮细胞
• 氧化损伤
• 存活率
• 抗氧化

【目的】探究过氧化氢(H2O2)诱导山羊乳腺上皮细胞(GMEC)氧化损伤的最佳条件，构建可靠、稳定的氧化损伤模型，为今后探究紫大薯花青素对氧化损伤的保护机制提供模型条件。【方法】试验采用二因子完全随机设计，第一因素为H2O2处理浓度，分别为0(对照组)、350、430、460、490、520和550μmol/L,第二因素为对GMEC的处理时间，分别为8、11、14、17 h。舍弃细胞存活率低于60%的处理组，并根据结果重新调整处理浓度与时间。然后通过细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及培养液内乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定确定最佳的H2O2处理条件。【结果】与对照组相比，各H2O2处理组作用8 h后GMEC存活率均显著降低(P<0.05),其中350、430、460μmol/L H2O2处理8 h时细胞存活率分别降低至64.6%、72.9%、66.2%,基本符合细胞存活率的筛选需求(70%)。因此，选择350、430、460、490、520μmol/L H2O2处理4、6、8、10 h进行后续试验。调整后，除4 h 430μmol/L处理组外，各处理组LDH活性在不同处理时间下均显著高于对照组(P<0.05),并随着时间的延长逐渐升高，10 h时各处理组LDH活性均达到最大值，且与浓度呈正比；各处理组ROS含量在6 h时均显著高于对照组(P<0.05),且8 h时各处理组ROS含量较6 h均大幅度显著升高(P<0.05),说明8 h为ROS含量变化的转折点；430、490、520μmol/L处理组MDA含量在处理8 h后均显著高于对照组(P<0.05),其中430μmol/L处理组MDA含量在8和10 h时显著高于对照组(P<0.05);各浓度组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性在处理6～8 h时均出现不同程度的降低，且8 h时仅430μmol/L处理组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著低于照组(P<0.05)。【结论】430μmol/L H2O2处理GMEC 8 h为构建GMEC氧化损伤模型最佳条件。

• 单位
  海南大学; 动物科技学院