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摘要
目的原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的660 ～ 1 468肽段, 制备并鉴定其多克隆抗体。方法将pCold TF-NGO2105660-1468 aa重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)菌中进行蛋白表达。包涵体蛋白经变性复性处理后纯化目的蛋白。目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清;采用ELISA法检测抗体效价, Western印迹分析抗体对淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白的特异性, 流式细胞仪分析抗血清与淋病奈瑟菌的亲和力, 黏附抑制实验评估抗NGO2105660-1468 aa抗体对淋病奈瑟菌对人宫颈上皮细胞ME-180细胞黏附作用的抑制能力。不同处理组间比较采用t检验。结果 NGO2105660-1468 aa蛋白以包涵体的形式呈现, 通过变复性和纯化后得到了可溶性NGO2105660-1468 aa蛋白, 以该蛋白免疫小鼠后抗血清的效价为5.12 × 106, 流式细胞仪分析结果显示, 该抗体能较好与淋病奈瑟菌的NGO2105660-1468 aa片段结合。黏附抑制实验结果提示, 相比未处理组的黏附率(100%), 抗NGO2105660-1468 aa抗体在20和40倍稀释时均能显著抑制淋病奈瑟菌的黏附作用(黏附率= 52.9%、79.2%;t = 8.40、5.29;P < 0.001、= 0.006), 呈现一定的浓度梯度依赖。结论成功表达及纯化出NGO2105660-1468 aa肽段蛋白, 制备出高效价的多克隆抗体, 该抗体与淋病奈瑟菌有较好的亲和力且有黏附抑制能力。
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