基于巨噬细胞极化观察白术内酯Ⅱ对胃癌细胞的作用

作者：袁梦云; 张星星; 谢晓东; 陈敏; 王红星; 吴坚; 赵智强^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2020, 26(21): 100-108.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20201928

• 白术内酯Ⅱ
• 巨噬细胞
• 胃癌
• 免疫调节

目的:研究白术内酯Ⅱ对巨噬细胞极化的影响并探讨其发挥抗肿瘤的作用机制。方法:用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度白术内酯Ⅱ作用不同时间,对巨噬细胞生长的影响,筛选出白术内酯Ⅱ的安全给药浓度。不同浓度白术内酯Ⅱ作用24 h,巨噬细胞与胃癌细胞共培养,光镜下观察2种细胞的存活状态,MTT比色法检测胃癌细胞的增殖变化,筛选出白术内酯Ⅱ的有效给药浓度。将细胞分为空白组、模型组、白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L-1)组。划痕实验观察不同浓度白术内酯Ⅱ作用后巨噬细胞对胃癌细胞迁移及形态的影响。流式细胞术(FCM)检测M1,M2型巨噬细胞表面标志CD86,CD206表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测M1,M2型巨噬细胞相关肿瘤坏死因子(TNF)-α,人类白细胞抗原2(HLA-DRA),CD80,转化生长因子-β(TGF-β),白细胞介素(IL)-10和IL-6 mRNA和蛋白表达;Western blot检测巨噬细胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和磷酸化(p)-PI3K蛋白表达。结果:当白术内酯Ⅱ质量浓度为1,10,50,100,200 mg·L-1时,对巨噬细胞生长无抑制作用;与模型组比较,50,100,200 mg·L-1白术内酯Ⅱ作用的巨噬细胞可显著抑制胃癌细胞增殖(P<0.01);与模型组比较,白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L-1)组胃癌细胞迁移率降低(P<0.05);白术内酯Ⅱ(200,100,50 mg·L-1)组M1型巨噬细胞表面标志CD86表达增高(P<0.05,P<0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L-1)组M2型巨噬细胞表面标志CD206表达下降(P<0.05);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L-1)组M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α,HLA-DRA,CD80 mRNA表达增高(P<0.05,P<0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L-1)组TNF-α蛋白表达增高(P<0.05);白术内酯Ⅱ(50 mg·L-1)组M2型巨噬细胞相关细胞因子TGF-βmRNA表达显著降低(P<0.01),白术内酯Ⅱ(200 mg·L-1)组IL-10,IL-6蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);白术内酯Ⅱ(200,100 mg·L-1)组p-PI3K蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:白术内酯Ⅱ通过减少巨噬细胞内p-PI3K的表达,诱导巨噬细胞向M1型极化,进而抑制胃癌增殖和迁移。

• 单位
  南京中医药大学