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摘要
目的 探究血小板反应蛋白1(THBS1)基因编辑骨髓间充质干细胞(BMSCs)对变应性鼻炎(AR)小鼠的鼻黏膜屏障功能与炎症反应的影响。方法 分离培养小鼠BMSCs，流式细胞仪测定细胞表面标记物表达，茜素红染色和油红O染色检测细胞成骨与成脂分化能力，鉴定分离的结果;使用含THBS1基因的慢病毒感染BMSCs，荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白EGFP表达，并以实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞内THBS1 mRNA和蛋白表达情况，鉴定感染效果。实验分为对照组、模型组、BMSCs组、THBS1-BMSCs组，每组15只，除对照组外的其余3组小鼠均构建AR模型，对照组和模型组小鼠均尾静脉注射0.1 m L PBS,BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠分别尾静脉注射0.1 m L BMSCs、0.1 m L经THBS1基因编辑的BMSCs。处理结束后，对各组小鼠流涕、挠鼻及喷嚏情况进行统计，ELISA法检测血清IFN-γ、Ig E、TNF-α、IL-4及IL-6的含量，HE染色和PAS染色观察鼻黏膜病理形态学变化，免疫荧光染色检测鼻黏膜内CK-5与β-tubulin表达情况，Western blot检测鼻黏膜内紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin的水平。结果 分离的细胞表面CD105、CD90和CD73为阳性表达，CD34和CD45为阴性表达，并具备良好的成骨与成脂分化能力，说明成功分离到BMSCs。经含THBS1基因的慢病毒感染后的BMSCs出现明显绿色荧光蛋白EGFP表达，THBS1 mRNA和蛋白相对表达均上调(P <0.05)。与对照组比较，模型组小鼠精神萎靡，伴有连续性喷嚏和挠鼻次数增加(P <0.05)，血清IFN-γ含量降低，Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均升高(P <0.05)，鼻黏膜结构受损，有大量嗜酸性粒细胞浸润，且杯状细胞数目也明显增加(P <0.05),CK-5与β-tubulin的荧光强度均减弱(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均下调(P <0.05);与模型组比较，BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠精神状态有所好转，喷嚏和挠鼻次数减少(P <0.05)，血清IFN-γ含量升高，Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P <0.05)，鼻黏膜内嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均减少(P <0.05),CK-5与β-tubulin的荧光强度增强(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达量均上调(P <0.05);与BMSCs组比较，THBS1-BMSCs组小鼠喷嚏和挠鼻次数减少(P <0.05)，血清IFN-γ含量升高，Ig E、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P <0.05)，鼻黏膜嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均进一步减少(P <0.05),CK-5与β-tubulin荧光强度显著增强(P <0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均上调(P <0.05)。结论 经THBS1基因编辑的BMSCs可明显增强AR小鼠的鼻黏膜屏障功能，降低炎症反应，从而减轻鼻部症状。
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单位黄冈市中心医院
