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摘要
目的 探究结核分枝杆菌Rv1511基因编码蛋白的基本生化性质，为该蛋白在大肠埃希菌中重组表达及评估其成为结核病检测标志物的可行性提供实验数据。方法 通过生物信息学方法获取Rv1511基因和氨基酸序列，预测其基本生化性质；构建以大肠埃希菌为宿主的重组表达载体pET28a(+)-Rv1511,经镍金属螯合层析获得高纯度重组蛋白，并进行Western blot验证。结果 Rv1511基因编码蛋白由340个氨基酸组成，该蛋白是GDP-d-甘露糖脱水酶，与糖代谢途径相关，可能参与细胞壁控制物质渗透作用。该蛋白为亲水性、无跨膜结构域的细胞内蛋白，其理论相对分子质量为38.342 41×103,等电点为6.08,有36个磷酸化位点和1个N-糖基化位。BepiPred-2.0预测该蛋白含有4个B细胞表位，SYFPEITHI和Rankpep预测含有8个CTL细胞表位和Th细胞表位；NetMHCIIpa 4.0预测T细胞表位，显示该蛋白有多个MHCI和MHCII结合位点。构建重组质粒，转染E.coli BL21(DE3)后存在本底表达情况，表达产物为不可溶包涵体，经8 mol/L尿素变性后镍金属螯合纯化获得纯度为92.6%的目的蛋白，SDS-PAGE和小鼠抗组氨酸蛋白抗体Western blot验证该重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达。结论 Rv1511基因及其编码蛋白在卡介苗中缺失，有望成为结核病临床检测潜在标志物。该蛋白存在多个修饰位点和抗原表位，可能与结核杆菌缺氧和营养匮乏状态下抗逆性相关，是潜在的抗结核药物靶点。制备的Rv1511基因重组蛋白具有反应原性，可为进一步评估其作为结核病检测标志物的可行性提供实验支持。
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单位基础医学院; 宁夏医科大学
