pEGFP-survivin对GBC-SD细胞生长的抑制及对化疗敏感性的影响

作者：沈汉斌; 吴耀辉; 龙浩成; 郑启昌; 龚建平

来源：中华肝胆外科杂志, 2010, 16(1): 43-47.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2010.01.017

• 化疗药物
• survivin
• 短发夹环RNA
• GBC-SD

目的 观察pEGFP-survivin对GBC-SD细胞化疗敏感性的影响.方法 以MTT法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/survivin三种细胞的增殖活性;用RT-PCR和Western印迹、检测各组细胞中survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的DDP作用相同的时间后,用MTT法检测3种细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡,并用MTT法筛选IC_(50)值,TUNEL法观察细胞核改变;另外检测DDP作用后各组细胞的caspase-3蛋白酶活性的变化.结果 GBC-SD和GBC-SD/EGFP细胞的增殖活性大致相同,而GBC-SD/survivin细胞的增殖活性则明显下降;RT-PCR和Western印迹均发现GBC-SD/survivin细胞中的survivin表达水平较其余两种细胞明显下降;在给与DDP作用后,GBC-SD/survivin细胞存活率和IC_(50)明显较低,细胞凋亡率较高,而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核.给与DDP作用后,各组细胞caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势,但GBC-SD/survivin细胞中caspase-3的活性明显高于另外两种细胞.结论 pEGFP-survivin表达的survivin shRNA能明显降低GBC-SD细胞中survivin的表达,提高对化疗药物的敏感性.

• 单位
  同济医院; 武汉市第五医院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院