血管外膜细胞钙化及其钙化机制研究

作者：谭小青; 张旭升^*; 樊小容; 黄战军

来源：中西医结合心脑血管病杂志, 2023, 21(18): 3347-3350.

• 血管外膜细胞
• 钙化
• 成骨样表型转化
• 自噬与凋亡
• 实验研究

目的:研究经体外诱导钙化建立大鼠血管外膜细胞钙化模型，检测钙化过程中成骨相关指标及凋亡、自噬相关蛋白的表达变化，旨在为心血管疾病模型提供更精确的细胞模型，并初步探讨其钙化机制。方法:原代提取大鼠胸主动脉外膜纤维细胞，取3～6代细胞使用诱导培养基(高糖DMEM+10%胎牛血清+10 mmol/L β-甘油磷酸+0.05 mmol/L抗坏血酸+100 mmol/L地塞米松)诱导钙化，诱导时间为3 d、6 d、9 d、12 d、15 d,筛选出诱导细胞钙化的最佳时间。对细胞采用茜素红S染色、细胞内钙含量测定和碱性磷酸酶(ALP)活性检测，鉴定是否成功构建钙化模型。采用实时定量聚合酶链式反应(PT-PCR)检测成骨相关因子骨形态生成蛋白2(BMP2)和核心结合因子α1(Runx2)的mRNA含量，蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和自噬相关蛋白微血管相关蛋白(LC3)、Beclin-1的表达水平，找出血管外膜细胞钙化的潜在机制。结果:当诱导钙化时间为15 d时，血管外膜细胞中主要钙化指标胞内钙含量及ALP活性上调(P<0.05),茜素红S染色显示钙化组有明显钙盐沉积。血管外膜细胞经钙化诱导后，BMP2和Runx2的mRNA水平上调，Bax蛋白水平上调，Bcl-2和Beclin-1蛋白水平下调，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调(P<0.05)。结论:钙化诱导培养基培养血管外膜细胞15 d可成功构建钙化细胞模型，血管外膜细胞钙化可能与细胞向成骨样表型转化有关，血管外膜细胞钙化过程涉及细胞自噬及凋亡调控。

• 单位
  深圳市龙岗区人民医院