非小细胞肺癌A549细胞培养上清液中外泌体的分离提取及鉴定

作者：郑巧鑫; 苏欣; 魏淑贞; 刘诗怡; 罗晶; 黄颖; 苏会岚^*; 李娜^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(11): 1368-1372.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.004032

• 非小细胞肺癌A549细胞
• 外泌体
• 分离提取

目的 分离提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清液中的外泌体，并进行鉴定。方法 分别采用超速离心法(ultracentrifugation,Ult)及改良法[即Ult法结合试剂盒Exo QuickTM(Ult-Exo QuickTM,U-EQ)]分离提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清液中的外泌体。BCA法测定外泌体浓度，纳米粒子追踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径分布，荧光染色及透射电镜(transmission electron microscope,TEM)法观察外泌体的形态，Western blot法检测外泌体表面CD63和HSP70蛋白的表达情况。结果 U-EQ及Ult法分离提取外泌体的浓度分别为1.355和0.909 mg/mL；颗粒总数分别为4.65×109和4.06×109粒/mL，峰值尺寸分布范围分别为81.5～165.5和59.5～176.5 nm，平均尺寸分别为(152.3±8.8)和(94.3±9.8)nm；直径均为30～150 nm,U-EQ法分离提取外泌体的形态更均一；均可见CD63和HSP70蛋白表达，U-EQ法分离提取的外泌体蛋白表达量更高。结论 U-EQ及Ult法均可从非小细胞肺癌A549细胞培养上清中分离提取外泌体，U-EQ法提取外泌体的浓度更高，粒径更均一。

• 单位
  成都医学院; 公共卫生学院