基于生物信息学分析的人ID4基因启动子表达载体的构建及鉴定

作者：杨波; 卢学春; 王冠军; 李薇; 康慧媛; 于力

来源：军事医学科学院院刊, 2007, (01): 32-35.

• ID4基因
• 生物信息学
• 启动子
• 调控元件
• 表达载体

目的:基于生物信息学分析构建人ID4基因启动子表达载体,以其作为研究ID4基因启动子表达调控分析的工作基础。方法:在分析人ID4基因启动子结构和调控元件的基础上,据UCSC基因组生物信息学中人ID4基因转录起始点(TSS)上游启动子区-643 bp及5′非翻译区(5-′UTR)+164 bp序列设计并合成引物,进行PCR扩增;以PCR产物作为模板经巢式PCR扩增了TSS上游启动子区-621 bp片段,将PCR产物回收、纯化后再连接到pGEM-T Easy载体上并转化至DH5α感受态大肠杆菌中构建成pGEM-T Easy-人ID4基因启动子重组质粒。转化产物经半巢式PCR及酶切鉴定,对得到的阳性克隆进行测序。结果与结论:成功构建出含有糖皮质激素受体、cAMP结合蛋白及雌激素受体反应调控元件序列的人ID4基因启动子表达载体。该表达载体的构建为进一步研究人ID4基因的启动子活性及表达调控奠定了基础。

• 单位
  解放军总医院; 吉林大学第一医院