微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

作者：方宇; 董重阳; 高斌礼; 李明宇; 李伟^*; 郭文; 焦志超

来源：陕西医学杂志, 2023, 52(12): 1619-1630.

• 骨质疏松
• 微小RNA-214
• 第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因
• 磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路
• 成骨细胞MC3T3-E1
• 增殖
• 分化
• 矿化

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点，通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较，miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较，miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高，PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低，而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较，miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低，PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路，从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

• 单位
  内蒙古医科大学; 内蒙古医科大学附属医院; 内蒙古医科大学第二附属医院