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摘要
目的分别构建HPV16 E5、E6和E7癌基因的重组慢病毒载体感染人口腔上皮细胞,为研究E5基因对口腔上皮细胞的致癌机制奠定基础。方法克隆HPV16 E5、E6和E7基因,分别构建p LVX-Ac GFP-E5、p LVX-Ac GFP-E6和p LVX-Ac GFP-E7重组慢病毒载体,与包装质粒共转染293T细胞。收集3种慢病毒上清液,分别感染口腔上皮细胞、腺嘌呤素筛选感染细胞,RT-PCR和Western blot法检测目的基因的表达。结果成功构建p LVX-Ac GFP-E5、p LVX-Ac GFPE6和p LVX-Ac GFP-E7重组慢病毒载体,获得3种慢病毒上清液,筛选得到3个稳定的细胞株。RT-PCR和Western blot均可检测到HPV16 E5、E6和E7基因在口腔上皮细胞内表达。结论本研究构建的3个重组慢病毒载体能成功感染口腔上皮细胞。
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