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摘要
为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力，本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒p VL1393-CPA，并通过BD BaculoGold TM转染试剂盒转染Sf9细胞后，经噬斑纯化获得单克隆重组病毒，将其感染High 5细胞进行表达，表达的重组蛋白经SDS-PAGE和western blot检测，结果显示均获得了45 ku的目的蛋白，即为重组α毒素。将重组α毒素用0.1%甲醛溶液灭活脱毒后与ISA 206 VG佐剂乳化制备亚单位疫苗(抗原含量为20μg/m L)，以40μg/只肌肉注射体质量1.5 kg～2.0 kg的家兔，同时设PBS对照组，注射后连续观察7 d，结果显示实验兔临床观察无异常，该疫苗对家兔的安全性良好。随后以20μg/只肌肉注射家兔，免疫21 d后以相同剂量加强免疫一次，同时设佐剂对照组和α毒素对照组，首免21 d、二免14 d时采血分离血清，采用ELISA方法检测免疫兔血清Ig G抗体效价，同时进行二免血清小鼠体内毒素中和试验以及家兔攻毒免疫保护试验，以评价该疫苗对家兔的免疫保护效力。结果显示，疫苗免疫组家兔血清Ig G抗体效价比佐剂对照组和毒素对照组均极显著增高(P<0.001)，二免血清对A型产气荚膜梭菌毒素小鼠体内的中和效价为32，疫苗免疫组家兔攻毒后均健活，攻毒保护率达100%，佐剂对照组和毒素对照组家兔攻毒后死亡率则为100%。上述结果表明制备的重组产气荚膜梭菌α毒素疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫保护效力，本研究为开发其他各型梭菌亚单位疫苗提供了重要借鉴。
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单位内蒙古伊利实业集团股份有限公司; 新疆农业大学
