氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF-β1诱导HConF细胞纤维化中的作用及其机制

作者：孙丽霞; 李英俊; 崔仁哲; 卢迪; 郑雅娟^*

来源：中华实验眼科杂志, 2019, (06).

• 氯离子通道
• 滤过泡瘢痕化
• 氯离子通道阻滞剂

目的 观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用,并进一步探索其作用机制。方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出TGF-β1最适作用时间和NPPB最适作用浓度,将细胞分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1＋NPPB组,CCK-8法检测各组HConF细胞增生值(A),采用流式细胞仪检测各组HConF细胞周期,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞迁移情况。采用Western blot和荧光定量PCR法检测HConF细胞向肌成纤维细胞转化的标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达,同时用Western blot法检测PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平。结果 TGF-β1可促进细胞增生,并呈时间依赖性；其中TGF-β1作用后48 h和72 h细胞A值比较,差异无统计学意义(P＝0.064),选择48 h作为TGF-β1作用的最适时间。NPPB抑制HConF细胞增生作用呈浓度依赖性；与对照组比较,50 μmol/L和100 μmol/L NPPB组细胞增生值明显降低,差异均有统计学意义(P＝0.020、0.000),选择100 μmol/L作为NPPB的最适作用浓度。TGF-β1＋NPPB组细胞A值、相对迁移面积和迁移细胞数较TGF-β1处理组下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)；TGF-β1处理组G1期细胞比例较对照组和TGF-β1＋NPPB组明显减少,S期和G2/M期细胞比例增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TGF-β1处理组α-SMA、细胞外基质COL-Ⅰ和FN的蛋白及mRNA相对表达量均明显高于对照组和TGF-β1＋NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05)；TGF-β1处理组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显高于对照组和TGF-β1＋NPPB组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 NPPB可能通过抑制PI3K和Akt磷酸化来抑制TGF-β1诱导的HConF增生、迁移、分化及细胞外基质合成等纤维化过程。

• 单位
  延边大学附属医院; 吉林大学第二医院