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摘要
目的利用能够表达大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）siRNA 的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体（pGEFP-C1）转染 SD 大鼠系膜细胞系、干扰 TGF-β1的表达,观察系膜细胞纤维连接蛋白（FN）的相应变化,探讨防治肾脏纤维化的新途径。方法根据大鼠 TGF-β1基因序列第538-556（A）和895-913（B）核苷酸序列,将 A、B 二段序列分别构建成小发夹结构,分别（A/B）或共同（A+B）插入一个 pGEFP-C1载体中,得到3个重组载体,能够分别或同时表达针对 A 或（和）B 序列的 siRNA,分别转染系膜细胞后,通过 ELISA 和 RT-PCR 动态观察系膜细胞 TGF-β1、FN 的 mRNA 和细胞培养上清中蛋白浓度的变化,探讨二者变化的相互关系。结果载体表达的 siRNA 与 TGF-β1基因第538-556序列相同者,能够显著干扰48 h 时间段 TGF-β1 mRNA（RT-PCR）（P<0.01）和蛋白分泌（细胞上清ELISA）（P<0.01）,脂质体转染刺激系膜细胞 FN 分泌显著增加,表现为对照组和 TGF-β1未被有效干扰组,FN 分泌于24 h 时段达到峰值,而 TGF-β1被干扰的实验组,FN 峰值被推迟到48 h 才出现（P<0.01）。结论 siRNA 干扰系膜细胞 TGF-β1的表达,能够减少 FN 的表达,但 FN 的表达可能并不完全依赖于 TGF-β1。
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