兔外周血内皮祖细胞培养及HTK基因体外修饰

作者：刘春喜; 李大庆; 张运; 姜虹; 王荣; 王旭平

来源：基础医学与临床, 2007, 27(11): 1241-1245.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2007.11.011

• 激肽释放酶
• 内皮祖细胞
• 动脉损伤
• 血管病

目的探讨兔外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)经体外基因修饰后能否成功表达目的基因。方法分离兔外周血单个核细胞进行定向培养,观察细胞摄取DiI-Ac-LDL的能力,免疫荧光法检测EPCs的细胞表面标记。同时PCR扩增人组织激肽释放酶(HTK)基因,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体,转染体外培养的EPCs后,荧光显微镜下观察HTK-EGFP融合蛋白的表达,通过RT-PCR与ELISA方法检测HTK的表达水平。结果细胞培养5～6d开始出现成簇的短梭形贴壁细胞,15d后形成鹅卵石样细胞层,传代后的细胞能摄取DiI-Ac-LDL,免疫荧光显示vWF和CD133+;pEGFP-HTK重组质粒在EPCs中可以稳定表达,表达的融合蛋白具有HTK和EGFP的双重活性。结论HTK基因修饰兔外周血EPCs对于血管病的治疗可能具有良好的前景。

• 单位
  山东大学齐鲁医院