微小牛蜱Enolase基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

作者：徐兴莉^*; 杨虎

来源：中国预防兽医学报, 2021, 43(08): 890-894.

• 微小牛蜱
• Enolase
• 真核表达
• 昆虫细胞

为对微小牛蜱烯醇酶(Enolase)基因进行真核表达及免疫反应原性分析,本研究采用RT-PCR方法扩增微小牛蜱Enolase基因的开放阅读框(ORF)序列,将其克隆至pFastBac1载体中构建重组质粒pFastBac1-Enolase,随后转化至大肠杆菌DH10Bac细胞中制备了重组杆粒Bacmid-Enolase,转染至SF9细胞以获得重组Enolase蛋白。通过双酶切、PCR及测序鉴定显示Enolase基因正确插入。利用SDS-PAGE分析表达产物,结果显示目的蛋白大小约为48 ku。利用western blot对重组蛋白进行分析,结果表明目的蛋白能被微小牛蜱抗原免疫兔阳性血清识别,具有良好的免疫反应原性。凝血酶时间(TT)的测定结果显示,Enolase重组蛋白能显著延长TT,具有抗凝血活性。本研究首次采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对微小牛蜱Enolase基因进行真核表达,并鉴定了重组蛋白的免疫反应原性,为开展Enolase免疫原性分析及功能研究奠定了基础。

• 单位
  生命科学与资源环境学院; 宜春学院