circBIRC6通过miR-944/CD44轴促进PD-L1介导的非小细胞肺癌免疫逃逸

作者：张田; 任丹^*; 李杰

来源：河北医学, 2022, 28(12): 1969-1977.

• 非小细胞肺癌
• 环状RNA
• circBIRC6
• miR-944
• 分化簇44
• 程序性细胞死亡配体1
• 免疫逃逸

目的:通过观察环状RNA(circRNA)BIRC6(circBIRC6)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达探讨其在肿瘤细胞免疫逃逸中的作用及分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系(H1975、HCC827、H1650、H1299和A549)和人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B),qRT-PCR检测检测circBIRC6、miR-944和分化簇44(CD44)、程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的表达。取A549细胞，分为正常对照(NC)组、si-NC组、si-circBIRC6组、si-circBIRC6+anti-NC组、si-circBIRC6+anti-miR-944组。转染48h后，采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中circBIRC6、miR-944和CD44、PD-L1的mRNA和蛋白表达水平；MTT法检测细胞增殖活性，Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力；将A549细胞与CD8+T细胞共培养，台盼蓝染色测定共培养系统中CD8+T细胞活力，流式细胞术检测共培养系统中CD8+T细胞凋亡，ELISA法检测共培养细胞培养上清液中可溶性PD-L1(sPD-L1)、干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、颗粒酶B和穿孔素水平，验证敲低circBIRC6在NSCLC免疫逃逸中的作用。通过双荧光素酶报告(DLRA)、RNA免疫沉淀(RIP)和RNA pull-down实验验证A549细胞中circBIRC6、miR-944和CD44的调控机制。结果:circBIRC6和CD44、PD-L1在NSCLC中呈高表达，miR-944呈低表达。敲低circBIRC6(0.36±0.05比1.01±0.12)可上调miR-944(3.45±0.38比0.99±0.10),抑制CD44 mRNA(0.39±0.05比1.00±0.10)、CD44蛋白(0.25±0.05比0.64±0.07)和PD-L1 mRNA(0.31±0.04比1.00±0.13)、PD-L1蛋白(0.17±0.03比0.52±0.06)表达，降低A549细胞增殖活力和迁移、侵袭能力(均P<0.05)。在共培养系统中，敲低circBIRC6的A549细胞可激活CD8+T细胞[(68.35±7.20)%比(35.82±4.14)%],抑制CD8+T细胞凋亡[(23.85±3.76)%比(56.01±6.22)%],降低sPD-L1水平，增加IFN-γ、TNF-α、颗粒酶B和穿孔素水平(均P<0.05)。下调miR-944可减弱circBIRC6敲低对A549细胞增殖、迁移和侵袭及CD8+T细胞活化的影响。DLRA、RIP和RNA pull-down实验证实circBIRC6可以靶向并结合A549细胞中的miR-944,且CD44是miR-944的靶标。结论:敲低A549细胞中的circBIRC6可通过下调PD-L1的表达和分泌，激活肿瘤微环境中的CD8+T细胞，进而抑制NSCLC的免疫逃逸；其分子机制可能与miR-944/CD44轴对PD-L1的调控作用有关。

• 单位
  陕西省咸阳市第一人民医院