鲑传染性贫血病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：肖璐; 杨苗; 林华; 陈世界; 安微; 王印; 刘荭; 严玉宝; 胡娟; 王军; 邬旭龙; 李丹丹

来源：中国兽医科学, 2017, 47(07): 915-919.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.07.019

• 鲑传染性贫血病毒
• TaqMan
• 荧光定量RT-PCR
• 口岸检疫

为建立快速、定量的鲑传染性贫血病毒(ISAV)检测方法,基于ISAV片段7 ORF1编码的结构蛋白(NS)保守基因序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化,建立ISAV的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,对其特异性、灵敏度及重复性进行评估,将其应用于口岸进境大西洋鲑报检样本ISAV检测中,并与OIE推荐的检测方法的检测结果进行比较。结果显示,本方法特异性强,灵敏度高,最低检测灵敏度达1.31×102copies/L。重复性试验结果显示,本方法的批内变异系数小于1%。299份2014—2016年间进口大西洋鲑报检样本的检测结果显示,ISAV的总检出率为6.35%(19/199),该结果与OIE推荐的检测方法的结果完全一致,且利用本方法测定的19份阳性样本的Ct值普遍低于OIE推荐检测方法测得的Ct值。结果表明,本研究中所建立的方法高效、敏感、特异、重复性好,在口岸检疫中具有广阔的应用前景,对于ISAV的鉴别诊断具有一定的参考意义。

• 单位
  四川出入境检验检疫局; 海南出入境检验检疫局; 深圳出入境检验检疫局; 四川农业大学